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ELISA試劑盒進口大鼠和western處理樣本的區(qū)別
更新時間:2018-05-31   點擊次數(shù):1383次

根據(jù)ELISA試劑盒進口大鼠實驗分析,將western和Elisa處理樣本卻別比對出來,分析給客戶。

Western Blot 樣品制備要加蛋白裂解液,然后冰上研磨,收集于EP管,冰上裂解30min,4度12000rpm離心15min,取上清分裝,即得到蛋白樣品。建議直接電泳,多余的-80保存。建議分裝的蛋白每支略多于一次上樣量,一次性用完一支,避免反復凍融。

ELISA樣品,直接腦組織冰上勻漿,收集于EP管,同上一樣離心,大約220-250ul每支分裝(因為ELISA上樣量基本都是每孔100ul,做復孔,每個樣品2孔,就需要200ul,為了避免不夠2孔,分裝時要大于200ul每支),直接實驗。多余的-80保存,一樣避免反復凍融。

不過ELISA少量樣品進行預實驗,或者查閱文獻,看看大概組織里有多高濃度,選擇合適的試劑盒,測量范圍要與組織濃度相符。避免濃度過高測量不準,或者濃度過低,小于試劑盒zui低可測濃度。
對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。ELISA試劑盒進口大鼠底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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